Diagnóstico por citometría de flujo de paciente con leucemia linfoide crónica

Introducci√≥n: La citometr√≠a de flujo es una t√©cnica de avanzada, objetiva y altamente sensible que permite el an√°lisis y la cuantificaci√≥n simult√°nea de m√ļltiples par√°metros celulares, muy utilizada en el estudio de la leucemia linfoide cr√≥nica, entidad caracterizada como un trastorno proliferativo maligno de linfocitos de aspecto maduro e incompetentes.

Objetivo: Describir la estrategia de diagnóstico del inmunofenotipaje por citometría de flujo de la leucemia linfoide crónica.

Métodos: Se analizó una muestra de médula ósea para la citometría de flujo de un paciente con sospecha clínica y morfológica de la leucemia linfoide crónica. El inmunofenotipaje celular se realizó con el empleo de anticuerpos monoclonales dirigidos contra los antígenos de diferenciación linfoides B y T. Se procedió a la lectura de la muestra en un citómetro GALLIOS, Beckman Coulter y los datos obtenidos se analizaron con el empleo del programa informático Kaluza.

Resultados: Los antígenos con expresión positiva fueron el CD19 (99,94 %), CD20 (81,56 %), CD5 (80,25 %), así como la coexpresión de CD5+/CD19+ (96,56 %), CD5+/CD20+ (80,56 %), CD19+/CD20+ (84,86 %), CD23 (62,65 %), CD49d (65,18 %), CD38 (52,17%). Se encontró monoclonalidad de la cadena ligera k en un 44,27 %. La expresión de los antígenos CD3, CD4, CD8y CD25 resultó negativa.

Conclusiones: La estrategia diagnóstica propuesta permitió identificar los antígenos más frecuentemente expresados en pacientes con leucemia linfoide crónica, así como la coexpresión de los mismos y la monoclonalidad de la cadena k, los cuales son marcadores celulares que permiten realizar el diagnóstico inmunofenotípico de la leucemia linfoide crónica, por citometría de flujo.

Yenisey Triana Marrero, Vianed Marsán Suárez, Yaneisy Duarte Pérez
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Dise√Īo y optimizaci√≥n de un tubo policrom√°tico de citometr√≠a de flujo para inmunofenotipo linfocitario perif√©rico

Introducci√≥n: La citometr√≠a de flujo permite la cuantificaci√≥n de las subpoblaciones de linfocitos con una elevada sensibilidad, especificidad y objetividad. Estas ventajas solo se logran con un proceso laborioso de dise√Īo individualizado y controlado para cada experimento.

Objetivo: Dise√Īar un protocolo de un solo tubo policrom√°tico de citometr√≠a flujo para inmunofenotipo linfocitario perif√©rico.

Métodos: Se realizó un estudio experimental in vitro con muestras de sangre periférica obtenidas de tres voluntarios sanos, en el Centro Nacional de Genética Médica, en marzo de 2019. El tubo se compuso de seis marcadores de linaje para identificar linfocitos B, T, natural killer y natural killer T. Se desarrolló un protocolo de lisis de hematíes sin lavado. Se emplearon anticuerpos monoclonales conjugados con fluorocromos. El punto óptimo de concentración correspondió al mayor índice de tinción y conservación de los porcentajes de positividad de cada población. Se realizó la construcción progresiva del tubo y se propuso una estrategia lógica de secuencia de ventanas para el análisis de datos.

Resultados: Los marcadores seleccionados permitieron realizar correctamente el inmunofenotipo linfocitario perif√©rico. En los cinco puntos de titulaci√≥n se observaron buenas discriminaciones entre las se√Īales positivas y negativas, excepto para el anti-CD56 que present√≥ una tendencia decreciente del √≠ndice de tinci√≥n. El volumen total de conjugados requeridos para la determinaci√≥n de los 6 ant√≠genos fue de 3,75 őľL por tubo.

Conclusiones: Se obtuvo un tubo policrom√°tico que permite el inmunofenotipo perif√©rico de forma r√°pida y precisa por seis ant√≠genos linfocitarios simult√°neamente, con el empleo de peque√Īos vol√ļmenes de conjugado y sangre.
Yaima Z√ļ√Īiga Rosales, Carlos Villegas Valverde, B√°rbara Torres Rives, Evelyn Hern√°ndez Reyes
 
Supervivencia de pacientes con linfoma no-Hodgkin y s√≠ntomas neurol√≥gicos seg√ļn inmunofenotipo del l√≠quido cefalorraqu√≠deo

Introducción: Los linfomas no-Hodgkin pueden infiltrar el sistema nervioso central y producir síntomas neurológicos, lo cual incrementa la mortalidad. El diagnóstico de esta infiltración se puede realizar mediante el estudio del líquido cefalorraquídeo por la técnica de citometría de flujo, con una mayor sensibilidad que la citología convencional.

Objetivo: Estimar la supervivencia global de pacientes con Linfoma no-Hodgkin y s√≠ntomas neurol√≥gicos seg√ļn el inmunofenotipo celular del l√≠quido cefalorraqu√≠deo.

M√©todos: Se realiz√≥ un estudio anal√≠tico y prospectivo en 15 pacientes con diagn√≥stico confirmado de linfoma no-Hodgkin y s√≠ntomas neurol√≥gicos, con citolog√≠a negativa del l√≠quido cefalorraqu√≠deo, tratados en el servicio de oncolog√≠a del Instituto Nacional de Oncolog√≠a y Radiobiolog√≠a, durante los a√Īos 2017 y 2018. El inmunofenotipo fue caracterizado mediante citometr√≠a de flujo multiparam√©trica.

Resultados: El 60.0 % de los pacientes fue del sexo femenino y el 53.4 % mayor de 60 a√Īos. Hubo una mortalidad del 26.7 %. Se realizaron 17 inmunofenotipos, el 58.9 % fue normal, el 23.4 % reactivo y el 17.7 % sospechoso de malignidad. La supervivencia global fue mayor en pacientes con l√≠quido cefalorraqu√≠deo con inmunofenotipo normal (HR. 0.04).

Conclusiones: La  citometría de flujo pudo discriminar células sospechosas de malignidad, en pacientes cuyas citologías fueron negativas. La presencia en el líquido cefalorraquídeo de células atípicas, de pleocitosis y de un índice de linfocito-monocito alto se asoció con una supervivencia global menor.

Carlos Agustín Villegas Valverde, Anamary Suárez Reyes, Griselda Torres López, Tamara González Madruga, Lázara Yinet Martínez Espinosa, Elías Antonio Gracia Medina, María del Carmen Arango Prado
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Consuelo Macías Abraham
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Norma Fern√°ndez Delgado
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Yenisey Triana Marrero, Vianed Marsán Suárez, Amanda Sánchez Ballester, Gabriela Díaz Domínguez
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Caracterización inmunofenotípica de pacientes con leucemia mieloide crónica en crisis blástica

Introducción: La leucemia mieloide crónica es una enfermedad maligna que afecta la célula madre hematopoyética. Es causada por una mutación genética que consiste en la translocación recíproca entre el cromosoma 9 y el 22, denominado cromosoma Filadelfia. El curso clínico de la enfermedad se divide en tres fases: crónica, acelerada y crisis blástica. Los pacientes en la fase de crisis blástica presentan poca respuesta a los tratamientos y un pronóstico desfavorable.  Objetivos: Caracterizar inmunofenotípicamente los blastos y sobre ellos, evaluar la expresión  de los antígenos específicos de linaje linfoide y mieloide de pacientes con leucemia mieloide crónica en crisis blástica. Materiales y Métodos: Se tomaron muestras de médula ósea y sangre periférica para citometría de flujo de siete pacientes con leucemia mieloide crónica en crisis blástica. El inmunofenotipaje celular se realizó en un citómetro GALLIOS, Beckman Coulter. Los datos obtenidos se analizaron con el empleo del programa informático Kaluza. Resultados: Seis pacientes desarrollaron una crisis blástica mieloide, lo cual representó el 85,72 % del total de las muestras y un solo paciente fue diagnosticado con una crisis blástica linfoide T cortical. Los antígenos que se expresaron con mayor frecuencia fueron los de linaje mieloide CD13 (85,7 %), CD15 (85,7 %), CD33 (71,4 %) y el marcador antigénico CD38 (57,1 %). Conclusiones: Se demostró que las crisis blásticas son mayoritariamente de estirpe mieloide y que, aunque muy poco frecuentes, pueden observarse crisis blásticas linfoides de tipo T. El inmunofenotipaje celular por citometría de flujo permitió definir el linaje de los blastos de los pacientes en la fase de crisis. Estos resultados fueron de gran importancia para el establecimiento de un tratamiento adecuado y eficaz en los enfermos.

Gabriela Díaz Domínguez, Vianed Marsán Suárez, Carlos Hernández Padrón, Rosa María Lam Díaz, Yamilé Quintero Sierra, Orlando Olivera Morán
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Wilfredo Roque García, Niurka Moran Obregon, Maday Rodriguez Acosta, Adys Gutierrez Diaz
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