Optimización de la extracción de Ácido Desoxirribonucleico para la tipificación molecular de los Antígenos Leucocitarios Humanos
Texto completo:
HTMLResumen
Para la tipificación de los Antígenos Leucocitarios Humanos (HLA), por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), utilizando el método de Cebador Específico de Secuencia (SSP), se necesitan entre 3 y 6 µg de Ácido Desoxirribonucleico (ADN) de elevada pureza. Se realizó un estudio en el Centro de Ingeniería Celular y Trasplante de Órganos y Tejidos de la Habana, Cuba, para determinar las condiciones y las muestras óptimas. El ADN se extrajo de muestras frescas y almacenadas en congelación de sangre total y capa leucocitaria, así como de sangre coagulada y plasma de 15 voluntarios; y de una suspensión de linfocitos. Se utilizó un extractor “QIAcube” y el sistema “QIAamp DNA Blood Mini”. La concentración y pureza del ADN se determinó mediante un espectrofotómetro de microgotas “EPOCH” con software “Gen 5”. A partir de 200 µL de sangre total y de capa leucocitaria se obtuvieron como promedio 5,8 y 22,4 µg de ADN respectivamente, sobrepasándose siempre los 3 µg. El 100% de las muestras de plasma y el 6,6% de sangre coagulada proporcionaron menos de 3 µg. De una suspensión de 30 x 106 linfocitos y se extrajeron 40 µg. El radio A260/A280 estuvo siempre entre 1,7 y 2. La sangre total y la capa leucocitaria, tanto frescas como congeladas rindieron en todos los casos una cantidad óptima de ADN, no así el plasma y la sangre coagulada. La mayor cantidad de ADN se extrajo de una suspensión de linfocitos. Todos los eluatos tuvieron adecuada pureza independientemente del tipo de muestra.
Palabras clave
Copyright (c)