Optimización de la extracción de Ácido Desoxirribonucleico para la tipificación molecular de los Antígenos Leucocitarios Humanos

Abstract

Para la tipificación de los Antígenos Leucocitarios Humanos (HLA), por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), utilizando el método de Cebador Específico de Secuencia (SSP), se necesitan entre 3 y 6 µg de Ácido Desoxirribonucleico (ADN) de elevada pureza. Se realizó un estudio en el Centro de Ingeniería Celular y Trasplante de Órganos y Tejidos de la Habana, Cuba, para determinar las condiciones y las muestras óptimas. El ADN se extrajo de muestras frescas y almacenadas en congelación de sangre total y capa leucocitaria, así como de sangre coagulada y plasma de 15 voluntarios; y de una suspensión de linfocitos. Se utilizó un extractor “QIAcube” y el sistema “QIAamp DNA Blood Mini”. La concentración y pureza del ADN se determinó mediante un espectrofotómetro de microgotas “EPOCH” con software “Gen 5”. A partir de 200 µL de sangre total y de capa leucocitaria se obtuvieron como promedio 5,8 y 22,4  µg de ADN respectivamente, sobrepasándose siempre los 3 µg. El 100% de las muestras de plasma y el 6,6% de sangre coagulada proporcionaron menos de 3 µg. De una suspensión de 30 x 10⁶  linfocitos y se extrajeron 40 µg. El radio A260/A280 estuvo siempre entre 1,7 y 2. La sangre total y la capa leucocitaria, tanto frescas como congeladas rindieron en todos los casos una cantidad óptima de ADN, no así el plasma y la sangre coagulada. La mayor cantidad de ADN se extrajo de una suspensión de linfocitos. Todos los eluatos tuvieron adecuada pureza independientemente del tipo de muestra.